液相色譜（HPLC）分析中**保留時間漂移**屬于常見問題。所謂“保留時間漂移”，是指在實驗重復進樣條件下，色譜峰的出峰時間發生了明顯變化（比預期早或晚，甚至波動不定），這不僅影響定量準確性，還可能影響定性結果。以下為造成保留時間漂移的主要原因總結：

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## 液相色譜保留時間漂移的原因

### 1. 流動相成分波動

- **流動相配比變化**：各溶劑比例（如甲醇/水或乙腈/水等）配制不準確、溶劑隨時間揮發或混合不完全，易致極性改變，直接影響保留時間。

- **緩沖液pH變化**：流動相中的緩沖液pH不同，極易影響酸堿性化合物的保留行為。pH有微小變化時，對弱酸/胺藥物保留時間影響尤為顯著。

- **流動相老化**：流動相長期存放可能發生成分分解、水分揮發、吸收CO?等導致配方失衡。

### 2. 流速不穩定

- **泵流速波動**：泵的機械故障、進樣器密封不良、活塞磨損或空氣進入泵體，都會導致流速不穩，進而引起保留時間提前或延后。

- **管路堵塞**：管路或過濾頭部分阻塞，某些流速下降，但儀器未檢測出來。

### 3. 柱溫波動

- 色譜柱未放在柱溫箱中，或柱溫箱控溫精度不高/環境受影響時，溫度升高會使分析峰保留時間縮短，溫度降低則使保留時間延長。

- 柱溫變化1–2℃，對大多數化合物保留時間都是可檢測變化。

### 4. 柱效及色譜柱本身因素

- **色譜柱老化/污染/損壞**：柱效下降，填料活性下降，導致保留時間變短或漂移，某些活性點被污染或溶出也會光學活性或極性改變。

- **使用新/舊柱未重新平衡**：新換柱子或長時間停用后再用，柱子的活性、溶劑含水量都需重新平衡。

### 5. 進樣問題

- **進樣量太大或進樣溶劑類型與流動相不符**：溶劑效應影響致峰型異常甚至保留時間偏移。

- **樣品溶液中污染物或緩沖鹽與流動相/柱不兼容**。

### 6. 泵或自動進樣器維護不良

- **密封圈老化**：密封不良，小量空氣混入，造成流動相輸送異常。

- **進樣閥堵塞或泄漏**。

### 7. 系統死體積與管路問題

- 色譜系統存在死體積或管路彎曲、松動、連接不良，易引入滯后或緩沖作用，表現為峰位置漂移。

### 8. 檢測器設置問題

- 檢測器流通池或參數（如采集啟動延時）設置不當，造成記錄的不一致。

### 9. 儀器及外部環境變化

- 外界供電波動、實驗室空調/氣溫變化，影響儀器及溶劑溫度。

### 10. 梯度洗脫問題

- 梯度系統管路切換、延遲體積設置不準、溶劑比例切換不及時，均可導致保留時間與理論不符。

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## 檢查與解決建議

1. 避免人為配液誤差，使用精確的移液和天平。

2. 保證流動相新鮮，pH準確，及時更換老化流動相。

3. 色譜柱使用前后充分平衡（建議平衡30min以上）。

4. 每次實驗充分開啟柱溫箱，維持穩定溫度。

5. 定期維護泵、進樣器和管路，杜絕漏液和空氣混入。

6. 使用與流動相極性一致或更弱的溶劑溶解樣品。

7. 梯度洗脫注意編程和比例切換同步，泵需定期校準。

8. 實驗記錄時注明環境溫度和設備設定，便于追溯。

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## 實驗中遇到保留時間漂移，可按上述各條逐一排查，往往能迅速定位原因并解決問題。